图1. 正常饲料与MCD饲料喂养的Ms4a3^CreRosa^tdTomato小鼠活体肝脏中髓系细胞空间分布特征

本研究利用单细胞RNA测序和单核-巨噬细胞的谱系示踪模型，揭示了MASH中不同单核细胞和单核细胞来源巨噬细胞亚群的时空动态图谱（图1）。整合公共数据库中MASLD、MASH小鼠和人肝脏单细胞RNA测序数据集，研究团队在MASH中鉴定出了保守的单核细胞来源巨噬细胞亚群，包括炎性Clec4e⁺巨噬细胞、抗原呈递相关的C1qc⁺巨噬细胞、脂质相关的Spp1⁺巨噬细胞和长寿命的MoKC（图2）。通过Ms4a3^CreERT2Rosa^tdTomato诱导性谱系示踪小鼠模型，研究发现肝脏募集的Ly6C^hi单核细胞大多数在疾病早期迅速分化成短寿命且可分泌炎性细胞因子的Clec4e⁺巨噬细胞，仅一小部分能够分化成C1qc⁺巨噬细胞和Spp1⁺巨噬细胞中间亚群，最终分化成长寿命MoKC，它们在肝小叶中央静脉周围定植不超过8周（图3）。

图2. 整合人鼠肝脏单细胞测序数据鉴定物种保守的单核来源巨噬细胞亚群

已有研究表明Notch信号参与KC谱系特征的维持，基于MASH中单核细胞向巨噬细胞分化的时空基础，本项研究发现Notch-RBPJ信号通路在控制单核细胞向巨噬细胞分化过程中发挥了关键作用。通过建立条件性基因敲除小鼠模型分析显示，Rbpj缺陷会抑制单核细胞向炎性巨噬细胞和MoKCs分化，同时促进保护性Ly6C^lo非经典单核细胞的产生（图3）。进一步分析显示Rbpj缺陷促进了Ly6C^lo单核细胞中由Nr4a1介导的CD36的表达和脂质吸收，进而增强了Ly6C^lo单核细胞与内皮细胞间的保护性相互作用。在MASH小鼠模型中，使用RBPJ拮抗剂抑制Notch-RBPJ信号通路，可以有效改善肝脏病理分级，减少炎症、纤维化和胆固醇相关的通路，且没有明显的副作用。

图3. 单细胞测序联合诱导性谱系示踪小鼠揭示肝脏中单核细胞向巨噬细胞的发育轨迹

综上，本研究揭示了MASH中不同单核细胞和巨噬细胞亚群的时间和空间动态图谱，阐明了Notch-RBPJ信号通路在调控MASH中肝脏巨噬细胞亚群的分化、定位和功能方面的重要作用，并提示靶向RBPJ信号通路可能是未来在临床诊疗中抑制MASH进展具有应用前景的潜在治疗措施之一（图4）。

图4. 文章结果总结

欧洲杯竞猜平台上海市免疫学研究所博士后郭薇和李子逸为本文的共同第一作者，欧洲杯竞猜平台上海市免疫学研究所苏冰教授和Florent Ginhoux研究员为本文的共同通讯作者。该工作得到了欧洲杯竞猜平台上海市免疫学研究所刘兆远研究员，Svetoslav Chakarov研究员，王静研究员，清华大学胡小玉教授，法国Gustave Roussy研究所Camille Blériot研究员，欧洲杯竞猜平台附属瑞金医院沈柏用教授，法国儿童疾病研究所Nicolas Venteclef教授等合作实验室研究人员的大力支持。该研究得到了国家自然科学基金、中国博士后科学基金项目资助，以及欧洲杯竞猜平台基础欧洲杯竞猜平台和上海市免疫学研究所流式、成像、测序和动物等平台和行政管理部门的支持。